文献分享：红细胞裂解液法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞

骨髓间充质干细胞是存在于骨髓腔内具有很强增殖 能力及多向分化潜能的一类成体干细胞，在一定条件下其不仅可以分化为同源于中胚层的间质细胞，还可以诱导分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、上皮样细胞、 心肌细胞、肝细胞等。近年来随着组织工程技术的快速发展，骨髓间充质干细胞的体外分离、培养及其增殖特 性的相关研究逐渐受到越来越多研究人员的关注。目前， 骨髓间充质干细胞常用的分离培养方法有全贴壁筛选培 养法、密度梯度离心法和流式细胞仪分离法等，由于骨髓液中存在大量的红细胞，近几年开始有人向骨髓液中加入红细胞裂解液来提高分离纯化骨髓间充质干细胞的效率，以期获得纯度高、数量多的骨髓间充质干细胞。实验探索了如何通过红细胞裂解液法获得骨髓间充质干细胞，及骨髓间充质干细胞各代细胞的增殖能力。

红细胞裂解液法分离纯化骨髓间充质干细胞，有以下优点：

①、经红细胞裂解液处理后的骨髓液内含有大量各种促进细胞生长的因子。红细胞及血小板的胞浆内含有丰富的促细胞生长因子，这些细胞因子可促进骨髓间充质干细胞的成集落的簇状生长，为骨髓间充质干细胞的生长提供更适应的微环境，以利于骨髓间充质干 细胞的增殖。
②、增加骨髓间充质干细胞的浓度，提高骨髓间充质干细胞的增殖速度。经红细胞裂解液处理后，骨髓液内细胞杂质明显减少，通过离心纯化，可以得到纯度更高的含有骨髓间充质干细胞的骨髓液，进而 可以明显较少骨髓间充质干细胞的原代培养时间，提高 骨髓间充质干细胞的增殖速度。
③、早期促进骨髓间充质干细胞的贴壁。实验发现经红细胞裂解液处理后，早期骨髓间充质干细胞的贴壁细胞数量明显较未经红细 胞裂解液处理所获得的数量多。可能的原因为经红细胞 裂解液处理后骨髓液内红细胞及血小板数量极少，影响骨髓间充质干细胞贴壁的杂质相对减少，为骨髓间充质干细胞贴壁保留出更多的空间，利于骨髓间充质干细胞的早期贴壁。 

上述实验所采用的红细胞裂解液法所培养出的骨髓间充质干细胞在生长至13d左右时细胞成典型的长梭形，排列规则均一，几乎无其他杂质细胞存在，细胞融合接近100%；经传代细胞培养比较不同代数细胞生长曲线时，发现P4代细胞具有*的增殖活性，适宜 于进一步的实验研究；通过细胞免疫荧光及流式细胞仪鉴定所培养的细胞表面分子CD44表达阳性，CD34 表达阴性，符合骨髓间充质干细胞的细胞生物学特性。故红细胞裂解液法也能够分离出高纯度的骨髓间充质干细胞，其具有稳定的生物学活性，较好的增殖活性，是一种操作简便、易于复制的骨髓间充质干细胞分离方法。

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本文参考文献：
红细胞裂解液法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞       张卫东，章方彪，史宏灿，谭荣邦，叶 钢，李广宇，潘 枢，孙 飞(扬州大学临床医学院，江苏省扬州市 225001)