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蛋白酶K是DNA提取的关键试剂

发布时间:2021-04-23      点击次数:1714
  蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌(tritirachiumalbumlimber)中纯化得到。蛋白酶K,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH4-12.5)均有活性。值得注意的是,蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果.
  蛋白酶K家族包含了各种由真菌、酵母及革兰氏阴性细菌分泌的细胞内肽酶。与其它的蛋白酶相比较,蛋白酶K具有高活力和高稳定性,其酶活不会被尿素、SDS和EDTA等变性剂抑制,且在高温、高盐或较高的pH等条件下,蛋白酶K仍能保持较高活性。因该酶在较广的pH范围(4~12.5)内及高温(50~70℃)均有活性,在提取DNA和RNA的缓冲液中具有很高的活性,可用于质粒或基因组DNA、RNA的分离,是DNA提取的关键试剂。   
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