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上一期我们为大家汇总了ELISA实验原理、样本准备和预实验相关的十个常见问题及解答，可能有心急的小伙伴早就想要了解更多后续关于ELISA实验方面的问题了，不要走开，接下来将给您带来相关解答~
Q：in vivo实验周期长，不太好做预实验，对ELISA结果会有影响么？怎么办？
A：如果您实验室之前建立的in vivo实验protocol经过验证，可以保证有效性，那么，可以不用再进行相关的预实验；并且，如果实验周期较长，样本获取不易，同时又需要检测较多指标，建议将样品分装冻存，避免反复冻融。ELISA实验还是建议进行一下预实验，摸清楚样本的佳稀释比例，取得更好的实验结果。
Q：检测样本是细胞培养上清，那么细胞数目对炎症因子的浓度有影响吗？
A：有影响，所以不同样本可以比较的前提条件是培养细胞数水平接近一致。因不同处理，可能会导致细胞生产状态不同，要保证在铺板时接种细胞数量水平一致。
Q：打开试剂盒，发现wash buffer析出结晶，对实验结果有影响么？怎么办？
A：wash buffer为高浓度盐溶液，在低温保存条件下，有可能出现结晶析出，为正常现象，可以放在37℃或55℃烘箱中，析出的结晶会溶解，溶解后可正常使用。不可以在结晶存在的情况下配置wash buffer。
Q：爱必信的ELISA试剂盒显色液是双组份的，有些其他品牌的是单组分的，使用单组分的有影响么？
A：HRP酶标二抗的ELISA试剂盒，显色底物一般为TMB，TMB不稳定，曝光或污染氧化后会出现显色反应，导致实验背景升高，或无法使用，所以爱必信的ELISA试剂盒将显色液调整为双组份，方便稳定保存，仅在使用前混合，避免了TMB的不稳定影响实验结果。如您选用的试剂盒为单组分显色液，在使用前检测是否为无色透明，如果是正常的，对结果也没有影响，可以放心使用。
Q：同一样品多次ELISA检测，测试结果差异大怎么解决？
A：应考虑的问题包括：
Q：副孔差别比较大，是没洗干净吗？
A：复孔值差异较大，主要原因应考虑加样是否准确，洗板过程中是否有残留以及是否有交叉污染。加样应注意移液器量程，以及枪头残留问题；洗板过程应注意不要有残留液体，需要进行拍干操作；孵育过程要更换封板膜，拍干过程要换吸水纸，避免交叉污染。
Q：加完终止液之后测的几次数据差别也蛮大，是什么原因？
A：加完终止液后，显色反应也不是永远停止，形成的黄色颜色会随着时间延长继续加深，建议在15 min内读数。
Q：整个过程需要避光吗？避光需要避到什么程度呢？
A：ELISA实验中，在酶标抗体孵育，以及显色底物孵育这两步建议避光，其他步骤无需避光。避光可采用锡纸包裹，或将整个ELISA板子放入暗盒或抽屉等无光处即可。
Q：封板膜什么时候用？每次加液后都要换吗？
A：封板膜在孵育样品、检测抗体以及HRP酶标抗体时，都要盖好封板膜，减少挥发及污染几率。每次使用后要更换新的封板膜。
Q：ELISA实验中的洗板步骤如果没有洗板机，需要如何操作？
A：实验室ELISA实验做的较多，还是建议使用洗板机洗板，效果更好，也更方便控制。如果没有洗板机，在洗板过程中，需要注意洗板液添加后不要从孔中溢出，在加洗板液后，静置1-2min，甩干液体后，在吸水纸上大力拍干；重复三次。
Q：手动洗板过程中，拍过抗体或抗原的滤纸需要扔吗？
A：是需要更换的，防止造成交叉污染，影响实验结果的准确性。
今天的FAQ就到这里啦，小编在这里做个总结，实验过程中重要的就是上样、孵育和洗板，上样要注意样本混匀、加样准确，孵育要盖好封板膜，避免交叉污染，洗涤则要避免液体残留，建议洗板机洗板，并且要拍干。注意这些细节问题，相信各位同学肯定可以得到好的ELISA实验结果，下期我们再给您带来ELISA数据获取及处理方面的一些问题，感兴趣的小伙伴们继续关注吧~
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