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点击次数:203 发布时间:2019-08-19

如何利用牛血清白蛋白测定蛋白浓度?

 
  牛血清白蛋白(BSA)在生化实验中有广泛的应用,一般作为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中,稳定酶活性,并可防止酶的分解和非特异性吸附;ELISA、WB中也常常用到,比如封闭液,样本稀释液,酶结合物稀释液都可以用BSA;蛋白定量时作为标准物;酶活测定反应中作为阴性对照;血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用,在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。
  BSA一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中,因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。加入BSA后,它可能起到“保护”或“载体”作用,不少酶类添加BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不会受到什么影响。对多数底物DNA而言,BSA可以使酶切更完全,并可实现重复切割。在37℃,酶切反应超过1h时,BSA可以使酶更加稳定,因为在不含BSA的反应缓冲液中,许多限制性内切酶在37℃下只能存活10~20min甚至更短的时间。而BSA可以结合缓冲液或底物DNA中抑制限制性内切酶活性的金属离子和其它化学物质。
  测定蛋白浓度
  按50:1配置工作液。10ul蛋白标准液+90ulPBS液稀释成0.5mg/ml的蛋白标准液。再分别以0、1、2、4、8、12、16、20ul将蛋白标准液加入96孔板的第1~8标准孔中,在其他样品孔中加入10ul待测样品。分别加PBS定容至20ul。各孔中加入200ul工作液,室温放置2小时。用酶标仪测定蛋白浓度,依标准曲线算出蛋白浓度。

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