牛垂体提取物的技术原理及使用方法

 

  牛垂体提取物高有丝分裂活性，一致的高活性生长因子和激素来源新西兰品种，采购文档支持，立即可用，无菌液体。角朊细胞的分离，采用中性蛋白酶及胰蛋白酶联合消化，分离角朊细胞。具体步骤如下，取包皮环 切术切除的成人包皮，切成约015c m ×015c m 皮块，用含青霉素 (10万 U L ) 、 链霉素 (100m g L ) 的 D -H ank s 液洗 3次，加入中性蛋白酶 (D isp ase :200U m l ) , 在 4℃下，消化 18~20h分离真。表皮，表皮部分再用 0及 011%的 ED 5后 , D S 培养基 200, 1500r m in 5in , , 加入 PB S 液，重 复洗细胞 3次 , 计数细胞。角朊细胞的培养，将体外分离的细胞 分成两部分，分别悬浮在含牛脑垂体提出物和不含牛脑垂体提出物的MB培养基中，以相同的细胞接。

 

  牛垂体提取物种密度 (50000 c m 2，在相同条件 (37℃ , 5%CO 2) 下 , 进行无血清培养。结果与讨论，继Green等，以3T3细胞为滋养层成功地培养了人角朊细胞之后，Boyce 等，采用无滋养层，无血清培养技术，在体外成功地培养了人表皮角朊细胞，并由此而开发出角朊细胞无血清培养 基MCDB153。此培养基中钙离子浓度较低 (0106mm o l L ) 角朊细胞在此培养基中呈现出基底细胞形状，以单层方式向外生长，不能成层，细胞之间缺 乏桥粒连接，不能形成表皮片。将体外分离的角朊细 胞接种在塑料培养皿上，在MB培养液中培养，4h 后，角朊细胞开始贴壁 , 24h 后 , 大部分贴壁，72h 后 , 可见到角朊细胞能以单个细胞为克隆 , 以单层形 式生长。10d 左右长满单层 ，可传代。与原代培养的 角朊细胞相比 , 传代后的角朊细胞更易贴壁和增殖。培养7d长满单层，可再行传代。