预制胶常见问题指南
更新时间：2018-03-15 点击次数：5473
注意事项 ★一定要使用我们盒内配套的电泳缓冲液； ★上样量和浓度不能过高。
1.我们的预制胶与哪些品牌电泳槽兼容？
| ● Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)；
● Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)；
● Life Technology (Invitrogen)；
● Novex Mini-Cell； | ● Mini Gel Tank (A25977) (请与EZbiolab 特制挡板配合使用)；
● 北京六一 DYCZ-25E；
● 君意东方 JY-SCZ2+；
● 天能 VE180。 |
2.Running buffer粉末如何溶解？ 电泳前，将running buffer 粉末用ddH2O溶解至500ml即可。
3.变性胶和非变性胶的区别？
变性胶与非变性的凝胶成分是一样的，均不含SDS。两者的*区别在于变性胶的running buffer中含SDS, 而非变性胶的running buffer不含SDS。
4.不同缓冲体系，蛋白迁移率不同？
Q1：为什么蛋白表达出来了，SDS-PAGE检测时大小不符？
A1：进行SDS-PAGE检测的时候蛋白的净电荷会影响迁移率。带电量高的蛋白会结合较少的SDS，因此阻碍了蛋白泳动。富含脯氨酸的蛋白会在SDS-PAGE胶中移动得特别慢。但是如果蛋白的等电点在5-9之间，并且组成的氨基酸组分没有明显的偏好，那么目的蛋白迁移率与预期相差较远就很有可能不是由于凝胶电泳造成的。这个时候利用C-端或者N-端的标签进行Western Blot，看是否由于蛋白被蛋白酶降解而导致多条目的条带或者比预期小很多的条带出现。如果蛋白酶过高可以尝试换个缺陷菌株。
5.剥胶困难怎么办?
*步: 用小刀划开侧边的胶即可打开玻璃板
第二步：顺着红色的线用小刀轻轻划一下
6.预染marker没有跑出来条带？
原因很可能是客户没有用我们的Hepes running buffer 来跑胶，而是用了如 tris-glycine等其他running buffer。
我们做过对比实验，结果如下图所示：
7.1.5mm的预制胶，您推荐的染色时间是几分钟合适？
微波炉加热至少90℃，置于摇床上染色30min。
8.条带跑斜或跑成点状的原因是什么？
条带跑斜和蛋白的浓度有关，不同的蛋白迁移速度， 不会有什么影响， zui终跑胶结果的条带还是平的。
跑成点状的原因是：
1、蛋白样品的总浓度过高，适当降低浓度。 2、样品没有处理充分 3、 没有吹打上样孔， 样品没有沉到胶孔底部。
9.尿素胶与TBE胶分离范围是哪些呢？
| 尿素核酸预制胶分离范围： | TBE核酸预制胶分离范围： |
5% 50–1000 nt
10% 35–300 nt
15% 10–50 nt | 5% 200 bp–2 kb
10% 50 bp–1.5 kb
15% 20 bp–1 kb |
尿素胶跑的是单链的核酸分子，所以单位是一个核苷酸 Nucleotide，简称nt。TBE胶跑的是双链核酸分子，所以单位是碱基对base pair，简称bp。
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