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血清那些事儿

发布时间:2018-03-07      点击次数:1124
 血清小知识
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。
胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是品质zui高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分zui少。
 
保存血清的方法
长期保存的血清必须储存于-20℃或-80℃低温冰箱中,由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。多数情况下一瓶500ml的血清不能够一次使用完毕,所以建议一次性将血清分装成一次性能够使用完毕的体积(如50ml)。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。
 
如何解冻血清
我们建议血清在2-8℃的冰箱过夜溶解,在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。瓶装血清解冻应采用逐步解冻法:-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天;然后移入室温,待全部溶解后再分装。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
 
血清中如果出现沉淀
血清中沉淀物的出现有许多种原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。
若欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不要以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
 
血清的热灭活
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养胚胎干细胞(ES)细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
热灭活一般是56℃、30分钟加热已完全解冻的血清,加热过程中须规则摇晃均匀。
除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多。
 
有必要对血清都进行热灭活吗?
实验显示,热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。经过处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至可能因为高温处理影响了血清的质量,造成细胞生长速率的降低。经过热处理的血清,沉淀物会显著地增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此若非必须,无需对血清进行热灭活处理。
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