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Annexin V-FITC PI 凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC PI 凋亡检测试剂盒

型    号: abs50001
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爱必信(absin) Annexin V-FITC&PI凋亡检测试剂盒,质量验证表明具有很好的可靠及稳定。爱必信(absin) 提供25T、50T规格可以选择,现货直接发货。
● 优点
1、可区分早期和晚期的细胞凋亡;
2、适用于流式细胞仪的定量研究,也可用于原位染色的定性研究;
3、适用于活细胞检测;
4、简便:只需分别加缓冲液、Annexin V-FITC和PI即可;
5、快捷:从加缓冲液

abs50001Annexin V-FITC PI 凋亡检测试剂盒的详细资料:

描述

在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

产品组分
 25 Tests50 Tests100 Tests
AnnexinV-FITC125μl250μl500μl
10×Binding Buffer1.5ml2.5ml6.5ml
Propidium Iodide125μl250μl500μl
操作步骤

贴壁细胞需用 0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加 2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用 1×PBS或 1×binding buffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。 
(1) 用去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer; 
(2) 细胞收集:悬浮细胞收集:离心 5 分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后( 注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC 的结合),在室温中,2000rpm 离心 5~10 分钟,收集细胞; 
(3) 细胞洗涤:用预冷 1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm 离心 5~10分钟,弃上清洗涤细胞; 
(4) 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 悬浮细胞; 
(5) Annexin V-FITC 标记:加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混匀后,避光,室温孵育 15 分钟; 
(6) PI 标记:上机前 5 分钟再加入 5μL 的 PI 染色。 
(7) 上机前,补加 200μL 的 1×Binding Buffer。

操作说明

(1) 使用前低速离心,以免液体积存管盖和管壁; 
(2) 本试剂只适用于实验,不适用于临床检测; 
(3) PI(propidium iodide,溴化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套; 
(4) Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察; 
(5) 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在 4℃下操作,以免影响细胞状态。 
(6) 在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免 PBS 残留,有可能会影响实验结果。 
(7) 为防止荧光衰变,宜在 1 小时内进行流式检测。 
(8) PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC 染色,最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。


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